La serie gira alrededor del Dr. Gregory House, un misántropo genio de la medicina, ególatra y de fuerte y marcada personalidad que dirige el departamento de diagnóstico médico del ficticio Hospital Universitario Princeton-Plainsboro de Nueva Jersey, dirigido por la Dra. Lisa Cuddy.​ Tiene dos especialidades, una en enfermedades infecciosas y otra en nefrología.

Su departamento de diagnóstico lo conforman tres o cuatro médicos, además de él mismo, según la temporada. Inicialmente el equipo estaba conformado por Eric Foreman, Allison Cameron y Robert Chase. Luego los integrantes del equipo cambian, integrándolo los doctores Eric Foreman, Lawrence Kutner, Remy Hadley y Chris Taub. Ocasionalmente se agrega uno de sus pocos amigos, el jefe de oncología del hospital James Wilson.

Al departamento de diagnóstico se le asignan casos complejos a los que House se suele enfrentar de forma impersonal, evitando el trato directo con los pacientes, siempre que pueda. House considera que la gente tiende a mentir ("todo el mundo miente") y que esa actitud complica o impide descubrir la verdad. Por regla general, en cada capítulo el equipo debe diagnosticar un caso difícil y para ello atraviesa todo un proceso investigativo lógico-empírico, exponiendo y descartando diversas hipótesis, a medida que los hechos se van sucediendo, hasta resolverlo.